Agar MRS 500g

USO

Agar MRS es un medio selectivo, basado en la formulación desarrollada por de Man, Rogosa y Sharpe. Proporciona los nutrientes para un buen crecimiento de lactobacilos en general, pero en especial de aquellas cepas que presentan un crecimiento deficiente en otros medios existentes previamente como L. brevis y L. fermenti, reemplazando un producto variable (zumo de tomate). El medio es apto para el crecimiento de bacterias del ácido láctico, incluidos Lactobacillus, Pediococcus y Leuconostoc. El citrato de amonio, a un pH bajo, inhibe la mayoría de los microorganismos, pero permite el crecimiento de Lactobacilli. El fosfato dipotásico y el acetato de sodio son agentes amortiguadores para mantener un pH bajo. Tween 80 es un emulsionante. Los sulfatos de manganeso y magnesio son fuentes de iones y sulfato. La peptona bacteriológica y el extracto de carne proporcionan nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. El extracto de levadura es una fuente de vitaminas, particularmente del grupo B. La dextrosa es el hidrato de carbono fermentable. El agar bacteriológico es el agente solidificante.

Los lactobacilos son microaerofílicos y generalmente requieren placas en capas para el cultivo aeróbico en medios sólidos. Las colonias sumergidas o superficiales pueden ser compactas o plumosas, y son pequeñas, opacas y blancas

FÓRMULA POR LITRO (g)

Agar bacteriológico 10

Peptona bacteriológica 10

Dextrosa 20

Fosfato dipotásico 2

Sulfato magnésico 0,2

Sulfato de manganeso 0,05

Extracto de carne 8

Acetato de sodio 5

Tween 80 1

Extracto de levadura 4

Citrato amónico 2

pH 6.2 ± 0.2 a 25°C

PREPARACIÓN

Suspender 62 gramos del medio en un litro de agua purificada. Mezclar bien y calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 12 minutos. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50°C y vaciar en placas de Petri estériles.

PROCEDIMIENTO

Para la enumeración de bacterias mesófilas ácido lácticas:

- Verter 1 ml de la muestra previamente diluida en una placa de Petri estéril.

- Añadir una primera capa del medio enfriado (45-50 ° C).

- Después de la solidificación, se vierte una segunda capa.

- Incubar las placas hasta 3 días a 35 °C o hasta 5 días a 30 °C. Si es posible, incubar las placas en una atmósfera de CO2.

- Es importante mantener una atmósfera húmeda porque las placas no deben secarse durante la incubación.

- El crecimiento de algunas cepas de Lactobacillus se inhibe a un pH más alto de 6.0 y es necesario acidificar los medios para promover el crecimiento.

Para acidificar el medio se pueden añadir unas gotas de ácido acético.